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通過實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)深入了解細(xì)胞

發(fā)布時(shí)間:

2022-08-26


概要:

通過實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)采用差速離心法實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種成分的分離,從而了解細(xì)胞核以及線粒體并進(jìn)行鑒定。

  通過實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)采用差速離心法實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種成分的分離,從而了解細(xì)胞核以及線粒體并進(jìn)行鑒定。

  分離純化的方法:

  根據(jù)細(xì)胞器的大小、形狀、密度等物理特性差異,離心成為亞細(xì)胞組分分離過程中最廣泛應(yīng)用的技術(shù)。

  離心是利用旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)的離心力以及物質(zhì)的沉降系數(shù)或浮力密度的差異進(jìn)行分離、濃縮和提純的一種方法。

  主要包括差速離心、密度梯度離心等方法。

  密度梯度離心:

  ·當(dāng)顆粒之間存在沉降系數(shù)差時(shí),在一定離心力作用下,

  顆粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶的方法。

  ·兩種濃度的蔗糖溶液制成的梯度,離心時(shí),線粒體和比它沉降系數(shù)小的細(xì)胞組分聚集到梯度交界處,而沉降系數(shù)較大的細(xì)胞組分沉到離心管底部。

  詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟:

  動(dòng)物肝細(xì)胞勻漿制備:

  (1)取出肝臟(2g左右),先用清水沖洗干凈后,放在置于冰塊上的培養(yǎng)皿中用剪刀剪成小塊,去除結(jié)締組織,用生理鹽水反復(fù)洗滌,盡量除去血污,用濾紙吸去表面的液體。

  (2)加入10mL預(yù)冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化鈣溶液(⑶將懸浮的肝組織液倒入組織搗碎機(jī)中進(jìn)行搗碎,直至沒有可見的組織塊為止。

  (4)將肝組織搗碎液分裝在50ml離心管中,實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)1500rpm 4°下離心2min (去除大組織塊)。

  用差速離心法分離細(xì)胞勻漿中的各種細(xì)胞組分:

  常用介質(zhì):

  常用介質(zhì)(高溶解性的惰性物質(zhì)):氯化艷、蔗糖、多聚蔗糖。

  整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中除了按規(guī)定操作外,要格外注意離心機(jī)的使用安全,另外盡可能先充分剪碎肝組織,縮短勻漿時(shí)間,整個(gè)分離過程不宜過長(zhǎng),以保持組分生理活性。


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