血清脂蛋白的離心機分離技術(shù)

發(fā)布時間：

2014-03-04

概要：

血清脂蛋白是由血液中脂質(zhì)與某些特異的蛋白質(zhì)組成的一類不均一的復合物。

因其所含脂與載脂蛋白的比例不同，其密度范圍在0.96g/ml或更低至1.21g/ml之間。

紙電泳中顯示四條帶即：乳密顆粒，極低密度脂蛋白，低密度脂蛋白，高密度脂蛋白。每種脂蛋白還可以分為更多的亞組分。

用電泳法分離含載脂蛋白較高的組份（HDL，VHDL）比較成功，而離心分離法則適合用于各種密度的血清脂蛋白分離。

一、梯度材料：

血清脂蛋白密度較低，常用的梯度材料為Nacl,NaI,Kbr,KI等，常用的緩沖劑為ED。

表一常用梯度材料的配置及密度（20°C）
　　名稱配置密度（g/ml）
　　Nacl 0.196M 1.006
　　NaBr 0.804M 1.063
　　NaBr 2.705M 1.21
　　KBr 0.747M 1.063
　　KBr 1.496M 1.21
　　NaCl+KBr+EDTA 153gNaCl+354gKBr+10ml
　　0. 2MEDTA+水至總量1000ml 1.35
　　NaCl,NaBr
　　A液:200gNaCl+800ml水
　　B 液:400gNaBr+600ml水
　　C液11.14gNaCl+788.6ml水(ρ=1.006gml) 10ml A液+31.7mlB液
　　10ml A液+15.6mlB液
　　10ml C液+2ml 1.35液
　　4ml C液+6ml 1.35液 1.35
　　1.31
　　1.063
　　1.21

二、預分離：

1、血細胞與血清分離：
　　離心參數(shù)：全血，角轉(zhuǎn)頭，3，000rpm×20min
　　結(jié)果：沉淀為血細胞，上部為血清。

2、乳糜粒分離：禁食12小時以上人血漿中乳糜粒含量極少，已進食者因其血漿含乳糜粒高，應先離心去除乳糜粒。
　　離心參數(shù)：4 ×10 (g×min),10°C.各種轉(zhuǎn)頭轉(zhuǎn)速均可。
　　梯度液配置：離心管下部3/4容積加血漿，上部1/4容積加0。
　　5MnaCl+0.3MEDTA,ph7.4
　　結(jié)果：乳糜粒上浮，吸出。

3、血清蛋白分離：除去球蛋白，白蛋白及其它蛋白質(zhì)。
　　離心參數(shù)：（2。5-3）×10 (g× hr), 各種轉(zhuǎn)頭均可。如角轉(zhuǎn)頭70，000rpm× 6hrs,10°C
　　配置：管容量1/3為血清，2/3為1。31g/ml,NaCl+NaBr,攪拌后終密度為1。21g/ml
　　結(jié)果：管上部1/6容積為血清脂蛋白，下部5/6為其它蛋白。

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